Hijo de un inmigrante griego y una estadounidense de ascendencia escocesa, el ambiente en el que creció fue culturalmente diverso, por lo que siempre estuvo en contacto con diferentes manifestaciones artísticas tanto por el lado de su padre como de su madre.
Estudió comunicaciones en la Universidad Estatal de Carolina del Norte, sin embargo, no llegó a completar sus estudios. No obstante, comenzó su carrera en el medio como actor de doblaje en la serie animada ‘Yo Gabba Gabba!’, que se transmitió entre los años 2005 y 2006. Además de otros programas televisivos como ‘Boston Commons’ de 1996 y ‘Late World with Zach’ en 2002.
Fue hasta 2009 que alcanzó la fama mundial con su papel de Alan Garner en la trilogía de ‘The Hangover’. Esta cinta logró ser un completo éxito y catapultó su carrera al punto de llevarlo a participar en otras cintas igual de populares como ‘Due Date’ y Dinner for Schmucks’ del año 2010.
Desde entonces, el actor ha estado siempre en el radar como una de las figuras más importantes de la comedia. Además de continuar trabajando en diferentes proyectos tanto televisivos como los que involucran a la pantalla grande. Galifianakis es considerado como uno de los actores cómicos más reconocidos y versátiles de la actualidad.